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miR-26a-5p下调DNMT3A表达抑制心肌成纤维细胞活化增殖的机制研究

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目的 研究miR-26a-5p在SD大鼠心肌纤维化心脏组织中的表达及通过下调DNA甲基化转移 酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法 构建SD大鼠心肌纤维化模型,HE和Masson 法观察病理学改变,qRT-PCR检测miR-26a-5p的表达,Western blot法测定Col1A1、α-SMA、DNMT3A 表达。TargetScan预测miR-26a-5p与DNMT3A间靶向结合关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证;提 取SD乳鼠心肌成纤维细胞,将miR-NC、miR-26a-5p、miR-26a-5p和pcDNA 3.1及miR-26a-5p和pcDNA 3.1-DNMT3A转染至细胞中,分别记为miR-NC组、miR-26a-5p组、miR-26a-5p+Vector组和miR-26a- 5p+DNMT3A组。qRT-PCR检测miR-26a-5p、DNMT3A、Col1A1和α-SMA mRNA水平,Western blot测定 DNMT3A、Col1A1和α-SMA蛋白表达,MTT法检测心肌成纤维细胞增殖能力。结果 ISO组SD大鼠心肌 细胞排列紊乱,组织胶原沉积明显增多,Col1A1、α-SMA、DNMT3A 蛋白表达升高,miR-26a-5p表达 降低。TargetScan预测DNMT3A是miR-26a-5p的潜在靶基因。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示, miR-26a-5p组心肌成纤维细胞中DNMT3A-Wt荧光素酶活性[(0.38±0.05) vs. (1.03±0.11),P<0.05] 较miR-NC组显著降低,而miR-26a-5p组DNMT3A-Mut荧光素酶活性[(0.97±0.09) vs. (0.99±0.10), P>0.05]与miR-NC组比较无明显差异,提示DNMT3A是miR-26a-5p的一个靶基因。与miR-NC组比较, miR-26a-5p组心肌成纤维细胞中Col1A1[(0.42±0.04) vs. (1.04±0.09),(0.33±0.03) vs. (0.77 ±0.08),P<0.05]、α-SMA[(0.53±0.06) vs. (1.02±0.10),(0.36±0.04) vs. (0.86±0.09), P<0.05]和 DNMT3A[(0.25±0.03) vs. (0.97±0.09),(0.32±0.03) vs. (0.75±0.08),P<0.05]的 mRNA和蛋白表达及细胞增殖能力均显著降低,而外源回补DNMT3A可逆转miR-26a-5p对心肌成纤维细 胞活化增殖的抑制作用。结论 miR-26a-5p在SD大鼠心肌纤维化心脏组织中低表达,miR-26a-5p可能通 过下调DNMT3A来抑制心肌成纤维细胞的活化增殖,从而改善心肌纤维化。

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参考文献:

  • 2008

  • 1

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